C肽放免试剂盒试验方法及样本要求

发布时间:2024-01-25
c肽放免试剂盒试验原理、方法
c-p 免放药盒是一种固相“三明治”夹心式免疫放射量度分析,由两株单克隆 抗体识别和分析。两株单克隆抗体分别抗 c-p 分子相距很远的两个位点:株单 抗包被于试管底部内壁;第二株单抗用 125i 进行放射性标记,用作示踪剂。存在于 标准品或待测样品中的 c-p 分子被夹在两株单抗之间。过量未结合的示踪剂在洗涤 过程中容易地被除去,而抗体仅保留了被吸附的抗体-抗原-示踪剂结合物。结合在 包被管上的放射活性的量与测定开始时存在的 c-p 的量成比例。
由于 c-p 极不稳定,溶解后需立即使用,其余溶液按每次使用量分装后置-20℃可 储存 3 个月,只能冻融一次,避免反复冻溶。
【适用仪器】 1、γ-计数器 2、振荡器
【样本要求】 110 微升人血清样本。 采静脉血 5ml 于塑料试管中,静置使其凝固后,1500 转/分离心,取其上清液, 放置玻璃瓶中。如果样本不立即使用,可在-25℃~-18℃储存 6 个月。
【试验方法】
1、 将实验所需试剂及样本放置室温,平衡至少 30 分钟以上才可进行操作; 标准品用 1.0ml 去离子水溶解后轻轻摇匀,放置 10min 左右方可使用。
2、 打开包被试管包,取出包被管进行编号,所有实验均做双管重复;
3、 取每个浓度的标准品、质控血清和样本 100µl 加入相应编号的试管中;
4、 每管均各加入 100µl 标记抗体液,室温(17-27℃)振荡 1 小时后,吸干 或倒出;
5、 每管均各加入 2ml 洗涤液后,吸干或倒出,再重复操作一遍此步骤;
6、 用 γ-计数器测定每管 1 分钟的放射性强度计数;
7、 从标准曲线上读取样本及质控血清的浓度。
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