人*脱羧酶自身抗体（gad-ab）elisa试剂盒
用 途：
人gad-abelisa试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、缓冲液中细胞上清液及各种体液中的gad-ab。本试剂盒可以检测天然和重组的gad-ab。本试剂盒于科研、而非用于临床诊断。
试验原理：
人gad-ab试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（elisa）.已知gad-ab浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将gad-ab和*标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的hrp。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物a、b，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中gad-ab的浓度呈比例关系。
试剂盒内容及其配制
试剂盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置 配制
96/48人份酶标板 1块板（96t） 半块板（48t） 即用型
塑料膜板盖 1块 半块 即用型
标准品：800pg/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按说明书进行稀稀
空白对照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用型
标准品稀释缓冲液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用型
*标记的抗il-2抗体 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
亲和链酶素-hrp 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用型
洗涤缓冲液 1瓶（60ml） 1瓶（30ml） 按说明书进行稀释
底物a 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
底物b 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
终止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
自备材料
蒸馏水。
加样器：5ul、10 ul、50 ul、100 ul、200、500 u、1000lul。
振荡器及磁力搅拌器等。
安全性
此试剂盒的人血制品中的hbsag、和抗hiv为阴性，但没有实验室可*保证此血制品不会传染肝炎、aids或其它传染病，依据当地的安全条例处理本试剂盒里的成份及血清和血浆等样品。
避免直接接触终止液和底物a、b。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项
试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物a、b液时，避免使用带金属部分的加样器。
使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
底物a应挥发，避免长时间打开盖子。底物b对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取od值。
加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
样品收集、处理及保存方法
血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
血浆-----edta、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
试剂的准备
标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：
800 pg/ml （6号标准品） 原倍浓度不用稀释直接加入50ul。
400 pg/ml （5号标准品） 100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液
200 pg/ml （4号标准品） 100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液
100 pg/ml （3号标准品） 100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液
50 pg/ml （2号标准品） 100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液
25 pg/ml （1号标准品） 100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液
0 pg/ml （空白对照） 原始浓度不用稀释直接加入50ul。
洗涤缓冲液（20×）的稀释：蒸馏水20倍稀释。
操作步骤
使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的*标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作四次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
每孔加入80ul的亲和链酶素-hrp，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作四次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
每孔加入底物a、b各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育15分钟。避免光照。
取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
在450nm波长处测定各孔的od值。
建议使用的实验方案
标准品浓度（pg/ml）
a 800 800 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
b 400 400 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
c 200 200 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
d 100 100 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
e 50 50 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
f 25 25 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
g 0 0 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
h 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
结果分析
以吸光度od值为纵坐标（y），相应的gad-ab 标准品浓度为横坐标（x），做得相应的曲线，样品的gad-ab含量可根据其od值由标准曲线换算出相应的浓度。
局限
6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到的结果。
试剂盒性能
灵敏度：zui小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数r值为0.990。
特异性：不与人其它细胞因子反应。
重复性：板内、板间变异系数均小于10%。