胰蛋白酶测试盒?操作过程

发布时间:2024-06-13
胰蛋白酶测试盒操作过程:
一、粗酶液提取:
1.组织:按照组织质量(g):试剂一体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml试剂一)冰浴匀浆,8000g,4℃离心10min,取上清,即粗酶液。2.血清或培养液:直接测定。 3.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1ml试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
二、测定操作: 1.分光光度计预热30min,调节波长到680nm,蒸馏水调零。2.试剂二、试剂三和试剂四置于30℃水浴保温30min。 3.对照管:取一支ep管,加入100μl粗酶液,200μl试剂二,混匀后置于30℃水浴保温10min;加入200μl试剂三,混匀后8000g,4℃离心10min;取200μl上清液,加入新的ep管,再加入1000μl试剂四,200μl试剂五,混匀后置于30℃水浴保温20min,于680nm测定光吸收,记为a对照管。 4.测定管:取一支ep管,加入100μl粗酶液,200μl试剂三,混匀后置于30℃水浴保温10min;加入200μl试剂二,混匀后8000g,4℃离心10min;取200μl上清液,加入新的ep管,再加入1000μl试剂四,200μl试剂五,混匀后置于30℃水浴保温20min,于680nm测定光吸收,记为a测定管。(注意与空白管不同,先加试剂三,后加试剂二) 5.空白管:取ep管,加入200μl蒸馏水,1000μl试剂四,200μl试剂五,混匀后置于30℃水浴保温20min,于680nm测定光吸收,记为a空白管。 6.标准管:取ep管,加入200μl标准品,1000μl试剂四,200μl试剂五,混匀后置于30℃水浴保温20min,于680nm测定光吸收,记为a标准管。注意:空白管和标准管只需要测定一次。
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