pcr法
原理 该法是通过pcr技术将支原体16srrna基因特异性扩增，来检测培养细胞中污染的支原体。pcr引物选自16sr rna基因上的支原体特异片段，此片段与其他细菌的序列无交叉性杂交反应。扩增产物用琼脂糖凝胶电泳，经溴乙啶（eb）染色后在紫外透射仪上进行检测。
u16sr dna引物用水稀释至40umol/l。
（1）.正向引物：5’-actcctacgggaggcagcagta-3’
（2）.反向引物：5’-tgcaccatctgtcactctgttaacctc-3’
2）pcr扩增
（1）在冰浴中对各样品制备pcr重要混合物，对每个样品均加入：
10x pcr缓冲液 5.0ml
25mmol/l dntps 混合物 0.4ul
40umol/l 16sr dna引物 每种引物1.0ul
40umol/l pbr322 dna 引物 每种 2.0ul
pbr322 dna 1pg/ml 2.0ul
dna聚合酶（5u/ml） 0.2ul
三蒸水 35.4ul
总量 45ul
（2）用无菌去离子水稀释样品为1:10，1:100。
（3）于每个eppendorf管中加45ul pcr扩增混合物，每管中分别加入样品原液及1:10，1:100稀释液各5ul，操作均在冰浴中进行。
（4）在每个eppendorf管中轻轻加入50ul无菌矿物油，覆盖在液面上。如dna扩增仪带有有制式热盖，此步骤可省略。
（5）将各管放入dna扩增仪的孔槽内，并执行以下循环指令：
①950c 10min 一个循环
②950c，30s→580c 1min→720c 1min, 共30个循环。
③zui后720c 10min延长循环。
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